Качество эмбрионов при ЭКО: классификация

Качество эмбриона косвенно прогнозируется с момента пункции фолликулов. Получив ооцит-кумулюсный комплекс уже субъективно можно судить о пригодности яйцеклетки к оплодотворению. Более точная диагностика полноценности происходит при ЭКО ИКСИ, когда перед интрацитоплазматической инъекцией ферментным раствором растворяют кумулюсные клетки.

В первую очередь качество эмбрионов зависит от полноценности половых клеток (мужских и женских).

Что такое фрагментация ДНК сперматозоидов

Неблагоприятные факторы, влияющие на способность половых клеток оплодотвориться и давать здоровую беременность:

• Экология.
• Интоксикации – курение, алкоголь, бытовая химия, лекарственные препараты, растворители, бензин.
• Гинекологические заболевания – СПЯ, эндометриоз – гормональнозависимые процессы, оказывающие влияние на качество ооцитов.
• Ослабленный иммунитет.
• Хроническое переутомление.
• Избыточный вес. Происходит нарушение гормонального баланса.
• Ограничение в пище. Вегетарианство, пост создают дефицит аминокислот, витаминов, микроэлементов.
• Радиация – самый неблагоприятный фактор – нарушает физиологичность процессов деления и роста клеток организма, в особенности тех, которые быстро делятся;
• Частая смена климата и часового пояса приводят к хроническому стрессу.
• Гормональная стимуляция овуляции.

Важно! Пациенты должны полностью выполнять рекомендации врача по проведению стимуляции овуляции. Пропущенная инъекция или сделанная не вовремя – снижает вероятность получения ооцитов при пункции, качество яйцеклеток, а следовательно, и зародышей для переноса.

Биохимическая беременность после ЭКО: что это такое, причины

Большое количество клеток при пункции фолликулов, в большинстве случаев, говорит об их низком качестве. Крайне редко бывает так, что из 10–15 полученных яйцеклеток оплодотворяются все и получается 10–15 бластоцист отличного или хорошего качества.

Для того чтобы улучшить качество эмбрионов для переноса перед входом в протокол ЭКО необходимо избегать неблагоприятного влияния перечисленных факторов или свести их к минимуму.

Непосредственно в протоколе ЭКО на качество эмбрионов и остановку их развития влияют две группы причин.

1. Неконтролируемые или эмбриональные:
   1. Хромосомные нарушения у эмбриона. При естественном зачатии боле 50% зигот имеют хромосомные аномалии. А женщины просто не подозревают насколько часто они бывают беременны. Плохого качества эмбрионы не приживаются и их отторжение неминуемо. При этом месячные могут приходить в срок или с задержкой, а объем выделений не меняться или немного увеличиваться.
   2. При ЭКО заранее трудно прогнозировать генетические характеристики пятидневных или трехдневных эмбрионов. Для этого существует преимплантационная генетическая диагностика – ПГД, когда до эмбриотрансфера – подсадки в полость матки проводится исследование генетического кода и происходит отбраковка некачественных единиц. Но для проведения ПГД есть свои показания, исследование не проводят в обязательном порядке, чаще всего к нему прибегают после неудачных предыдущих попытках. Остановка развития возможна на этапе культивации и после подсадки в матку, несмотря на то, что бластоцисты оценивались как «хорошие» или «отличные».
   3. Дефекты внутриклеточных структур: митохондрий, нитей хромосом.
   4. Сбои в активации собственного генома. Обычно это происходит на третьи сутки. До этих пор деление бластомеров инициировалось материнскими запасами ооцита. Нарушение активации генома – одна из возможных причин остановки деления и резкого ухудшения качества эмбриона. Исходя из этих фактов подсадку часто проводят после продленной культивации на 5 день, чтобы проверить, как морула переживет 4 сутки.
2. Внешние причины:
   1. Оснащенность лаборатории современным оборудованием в достаточном количестве.
   2. Среды для культивации прямо виляют на качество эмбрионов, их развитие. Существуют среды для продленной культивации step-by-step, которые отличаются по составу в зависимости от стадии развития и моносреды, используемые от начала и до конца культивации. Но даже самая лучшая среда может тормозить развитие или ухудшать качество эмбрионов, при этом влияя на приживаемость в матке и имплантацию.
   3. Температурный режим;
   4. Газовый состав воздуха;
   5. Бесперебойная работа нескольких инкубаторов;
   6. Профессионализм и слаженность работы в коллективе специалистов.

Оценка качества эмбрионов при ЭКО происходит ежедневно. У ЭКО ИКСИ – есть преимущество – эмбриолог точно знает время оплодотворения в отличие от классического ЭКО, так как проводит процедуру самостоятельно. Это позволяет вести наблюдение за развитием с момента оплодотворения и оценивать эффективность развития более точно.

Сейчас существует оборудование, позволяющее вести запись дробления, которая используется для выбора самого качественного эмбриона. Характеристики, полученные при оценке, записываются в журнал, чтобы иметь возможность отслеживать динамику. Сразу после оплодотворения – слияния полярных телец яйцеклетка должна поделиться и образоваться два бластомера. Если этого не происходит или образуется больше клеток – эмбрион оценивается как некачественный.

Для определения хороший эмбрион или плохой существует много критериев:

• Внешний вид. Клетки должны быть правильной, равной и симметричной формы, внешняя оболочка – без утолщений.
• Соответствие дню развития по количеству клеток.
• Степень фрагментации – процентное соотношение безъядерных клеток (их еще называют кусочки цитоплазмы) к нормальным бластомерам (клеткам). Цитоплазматическая фрагментация бластомеров – это отсоединение от клетки фрагментов цитоплазмы, окруженной мембранной, но без ядерного содержимого. В норме каждый бластомер должен иметь ядро. Чем выше процент фрагментации, тем хуже прогноз для дальнейшего развития. Считается, что 25% фрагментации – вариант нормы. Часто мелкие фрагменты могут опять участвовать в дальнейшем построении других клеток. Фрагментация более 25% – признак снижения жизнеспособности. Тем не менее, фиксируются случаи, когда зародыши с высокой степенью фрагментации на 5 и 6 день становятся качественными или бластоцистами. Поэтому фрагментированные эмбрионы не отбраковываются а культивируются до 5–6 суток. У них есть шанс.
• Размеры. Клетки должны быть равными по объему и правильной формы.
• Наличие включений. Любые включения – неблагоприятный признак. Вакуоли – цитоплазматические включения, окруженные мембранной и содержащие жидкость, снижают частоту формирования хороших эмбрионов. Зиготы с выраженными вакуолями могут не вступать в дробление или происходит цитолизис – разрушение клеток.
• Равномерность деления, чем короче промежуток времени эмбрион имеет непарное количество бластомеров, тем лучше. Например, короткий промежуток между тремя и четырьмя клетками говорит о том, что два бластомера на двухклеточной стадии поделились равномерно. Кроме этого, деление должно происходить в определенное время.

Классификаций эмбрионов по качеству существует много, но преимущественно используют две классификации: для оценки трехдневных и пятидневных эмбрионов.

Классификация трехдневных (и двухдневных) эмбрионов происходит по количеству клеток (соответствие дню развития) и степени фрагментации.

Запись выглядит так: 6А, 4B, 4C, где цифра – количество клеток, а буква соответствует степени фрагментации. Расшифровывается аббревиатура так: класс 6A – шестиклеточный эмбрион отличного качества без фрагментации, класс 4B – четырехклеточный эмбрион хорошего качества с содержанием безъядерных элементов, класс 4C – четырехклеточный эмбрион удовлетворительного качества с фрагментацией.

Качество эмбрионов на 5 день оценивается по трем критериям:

• размеру бластоцисты (цифровое обозначение) – стадия экспансии;
• качеству внутриклеточной массы (первое буквенное обозначение);
• качеству трофобласта или трофоэктодермы – тонкого слоя клеток, из которых образуются внезаредышевые органы (второе буквенное обозначение).

На 4 сутки у морулы инициируется процесс компактизации, а ближе к концу 4 суток начинается процесс кавитации. Это означает, что межклеточные связи становятся более прочными, а внутри появляется полость. Вскоре клетки разделятся на внутриклеточную массу (ВКМ) и трофоэктодерму. На 5 сутки внешне ВМК выглядит в виде островка у наружной оболочки. А трофоэктодерма – окружает образованную полость. Из нее формируются плодные оболочки, внезародышевые органы, она ответственна за имплантацию.

Таким образом, бластоциста 5CD – эмбрион в хетчинге после ПГД, с серьезными дефектами ВКМ и дегенеративным трофобластом, а 3BB – экспандированная бластоциста с хорошо различимой ВКМ, содержащей дефекты и многослойным трофобластом.

Актуальное видео

Эмбриоскопия — оценка качества эмбрионов